BAB III
METODOLOGI PENELITIAN

3.1	Tahap Penelitian

Persiapan Penelitian
•	Pembuatan dan penyiapan media pertumbuhan jamur (PDA dan PDC) 
•	Penyiapan zat warna Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5)
•	Penyiapan biosorben jamur mati dan adsorben karbon aktif
•	Pembuatan kurva kalibrasi

Penyiapan alat, bahan dan  mikroorganisme

Pengambilan sampel

Analisa parameter yaitu konsentrasi  zat warna dan pH

1.	Penentuan goodness of fit R2 (persamaan Freundlich, persamaan Langmuir)
2.	Penentuan kapasitas biosorpsi jamur mati berdasarkan persamaan isoterm terpilih
3.	Penentuan kapasitas adsorpsi karbon aktif berdasarkan persamaan isoterm terpilih

Penarikan kesimpulan

Penelitian Pendahuluan
•	Penentuan pH optimum penyisihan zat warna CIRB 5 oleh jamur mati dan karbon aktif dengan variasi pH 1 – 12
•	Penentuan waktu kesetimbangan penyisihan zat warna CIRB 5 oleh jamur mati dan karbon aktif pada pH optimum

Penelitian Utama
1.	Penentuan pola adsorpsi melalui persamaan isoterm sorpsi Freundlich dan isoterm sorpsi Langmuir pada penyisihan zat warna CIRB 5 oleh jamur mati pada pH optimum
Variasi berat awal 0,05 – 0,5 gr kemudian diubah menjadi 0,02 – 0,14 gr dengan variasi konsentrasi 60, 80, 100 mg/L
2.	Penentuan pola adsorpsi melalui persamaan isoterm sorpsi Freundlich dan isoterm sorpsi Langmuir pada penyisihan zat warna CIRB 5 oleh Karbon aktif pada pH optimum
Variasi berat 0,05 – 0,5 gr dengan variasi konsentrasi 60, 80, 100 mg/L

Penulisan laporan

Dalam pelaksanaan penelitian penentuan kapasitas adsorpsi biakan tercampur jamur mati dan karbon aktif zat warna tekstil Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5) mengikuti diagram sebagai berikut : 

       
Gambar 3.1 Diagram Alir Penelitian
3.2 	Alat dan Bahan yang Digunakan
3.2.1 	Alat yang Digunakan 
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah :
•	Labu Erlenmeyer EX RRC, yaitu sebagai tempat percobaan pendahuluan secara batch.
•	Labu Ukur EX RRC, yaitu alat yang digunakan untuk pembuatan dan pengenceran larutan stock zat warna.
•	Gelas Kimia PYREX, yaitu alat untuk pembuatan media kentang.
•	Gelas Ukur EX RRC, yaitu alat untuk mengukur jumlah sampel/larutan yang akan digunakan.
•	Tabung Reaksi PYREX, yaitu alat yang digunakan untuk menyimpan PDA serta mengembang biakkan jamur.
•	Spatula, yaitu alat yang digunakan untuk mengambil dan memindahkan zat yang akan ditimbang.
•	Kompor Listrik MASPION, yaitu alat yang digunakan untuk memanaskan dalam pembuatan substrat pertumbuhan jamur.
•	Kertas Saring, yaitu alat untuk memisahkan filtrat dengan padatan yang terkandung dalam larutan.
•	Jarum Ose, yaitu alat untuk mengambil biakan jamur yang akan diinokulasikan.
•	Pembakar Bunsen, yaitu alat untuk memanaskan (mensterilkan) jarum Ose sebelum dan sesudah mengambil biakan jamur.
•	Spektrofotometer MILTON ROY SPECTRONIC 200, yaitu alat untuk melakukan pengukuran konsentrasi zat warna melalui absorban zat warna tersebut.
•	Kuvet MILTON COMPANY, yaitu sebagai tempat sampel untuk pembacaan dengan spektrofotometer.
•	pH Meter LUTRON YK-2001, yaitu alat untuk mengukur pH.
•	Shaker KOTTERMANN 4020, yaitu alat yang digunakan agar media dan mikroorganisme dan biosorban yang ada dalam labu Erlenmeyer tercampur dengan baik.
•	Autoclave INTERNASIONAL, yaitu alat untuk mensterilkan media dan mematikan jamur untuk digunakan sebagai biosorban.
•	Waterbath ROST FREI, yaitu alat yang digunakan untuk mengatur suhu pada kolom adsorpsi sehingga suhu dalam kolom adsorpsi konstan.
•	Oven NEY M-525 Series II EX USA, yaitu alat yang digunakan untuk mengeringkan miselia pada suhu tertentu.
•	Sentrifuge 80-2, yaitu alat yang digunakan untuk memisahkan larutan dengan padatan.
•	Tabung Sentrifuge, yaitu alat yang digunakan untuk menyimpan larutan sampel yang akan dipisahkan padatannya dari larutan.
•	Neraca Analitik DENVER USA, yaitu alat untuk menimbang biosorban jamur mati dan berat zat warna dalam bentuk bubuk yang akan dilarutkan menjadi larutan stock zat warna.
•	Inkubator WTB BINDER, yaitu alat untuk menginkubasi jamur biakan.
•	Mortar, yaitu alat untuk menghaluskan miselium jamur yang telah dikeringkan.
•	Botol Semprot, yaitu alat yang digunakan untuk menyimpan aquadest.
•	Ayakan 50 dan 60 mesh, yaitu alat untuk menyaring jamur mati maupun karbon aktif yang telah dihaluskan agar besarnya seragam.
•	Kolom Adsorpsi, yaitu alat yang digunakan dalam percobaan utama sebagai tempat percobaan proses adsorpsi. 
Kolom adsorpsi memiliki selubung di bagian luarnya. Selubung tersebut diisi air dari waterbath untuk menjaga agar suhu dalam kolom adsorpsi tetap terjaga. Kolom adsorpsi berbentuk tabung dengan tinggi 22 cm dan diameter 6,4 cm. Adapun gambar reaktor kolom adsorpsi dapat dilihat pada gambar berikut :

3

11

2

4

Arah Aliran

5

6

Gambar 3.2 Reaktor Kolom Adsorpsi

Keterangan :
1.	Waterbath
2.	Kolom Adsorpsi 1 + Magnetik Stirer
3.	Kompor Magnetik 1 
4.	Kolom Adsorpsi 2 + Magnetik Stirer
5.	Kompor Magnetik 2 
6.	Pompa 

•	Pengoperasian Kolom Adsorpsi
Kolom adsorpsi yang digunakan dipasang secara seri. Pengoperasian kolom adsorpsi ini dilakukan dengan cara memasukkan larutan zat warna CIRB 5. Kemudian memasukkan adsorben ke dalam kolom adsorpsi dengan berat tertentu, lalu dilakukan pengadukan tetap sebesar 125 rpm dan dibiarkan pada temperatur tetap 25oC. Penggunaan suhu 25oC dikarenakan suhu ini merupakan suhu kamar. 

Temperatur yang tetap didapat dengan menyambungkan selang yang berada pada kolom adsorpsi terhadap waterbath. Lalu dilakukan pengaturan suhu sesuai dengan yang diinginkan dalam penelitian. Kemudian air yang keluar dari selubung kolom adsorpsi dipompa untuk dikembalikan ke dalam waterbath sehingga temperatur dalam kolom adsorpsi menjadi tetap.

3.2.2 	Bahan yang Digunakan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah :
1.	Dextrose yaitu bahan makanan dan sumber nutrisi yang dibutuhkan oleh jamur
2.	Agar yaitu bahan pengental dan pemadat dalam pembuatan media padat pertumbuhan jamur
3.	Aquadest yaitu air sulingan atau murni yang digunakan dalam pembuatan larutan stock zat warna, dan digunakan pula sebagai pembilas
4.	Zat Warna Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5), yaitu zat warna yang digunakan dalam penelitian.
5.	Biakan Tercampur Jamur yaitu organisme yang digunakan dalam penelitian yang berfungsi sebagai biosorben. Jamur yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari jamur jenis Aspergillus sp.,Penicillium sp., dan Saccharomyces sp. 
6.	Larutan NaOH yaitu bahan kimia yang digunakan untuk mengatur pH agar larutan semakin basa.
7.	Larutan HCl yaitu bahan kimia yang digunakan untuk mengatur pH agar larutan semakin asam.
8.	Karbon Aktif Granular Bratako Chemical yaitu bahan yang digunakan sebagai adsorben pembanding dengan biosorben jamur mati.

3.3  	Persiapan Penelitian Pendahuluan dan Utama
3.3.1 	Media Pertumbuhan
Untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme diperlukan suatu substrat yang disebut media. Sedangkan media itu sendiri harus dalam keadaan steril, artinya bebas dari semua bentuk kehidupan.
Media pertumbuhan yang digunakan untuk pertumbuhan jamur adalah Potato Dextrose Agar (PDA) dan Potato Dextrose Cair (PDC). 

•	Potato Dextrose Agar (PDA)
Komposisi media agar adalah :
•	200 gr kentang yang telah diiris-iris
•	10 gr dextrose
•	14 gr agar
•	1000 ml aquadest

Langkah pembuatan PDA :
1.	Rebus kentang yang sudah diiris dalam 1000 ml aquadest selama 1 jam yang mana volume aquadest harus dijaga agar tetap 1000 ml. 
2.	Saring air kentang tersebut setelah 1 jam
3.	Masukkan dextrose dan agar ke dalam air kentang.
4.	Atur pHnya menjadi 4 dengan menggunakan HCl 1N. 
5.	Distribusikan air kentang tersebut ke dalam beberapa tabung reaksi sebanyak ± 7 ml. 
6.	Sterilkan dalam autoclave pada tekanan 1,5 atm selama 15 menit. 
7.	Tabung reaksi yang berisi agar steril didiamkan hingga memadat dalam keadaan miring. 

•	Potato Dextrose Cair (PDC)
Komposisi media cair terdiri dari :
•	200 gr kentang yang telah diiris-iris
•	10 gr dextrose
•	1000 ml aquadest

Langkah pembuatan PDC :
1.	Rebus kentang yang sudah diiris dalam 1000 ml aquadest selama 1 jam yang mana volume aquadest harus dijaga agar tetap 1000 ml. 
2.	Saring air kentang tersebut lalu masukkan dextrose.
3.	Atur pHnya menjadi 4 dengan menggunakan HCl 1N.
4.	Distribusikan ke dalam beberapa labu Erlenmeyer sebanyak ± 90 ml. 
5.	Sterilkan dalam autoclave pada tekanan 1,5 atm selama 15 menit. 

Penambahan dextrose pada air kentang bertujuan untuk memenuhi kebutuhan gula dalam media. Menurut Pelczar (1993), konsentrasi gula dalam media pertumbuhan jamur adalah  4 – 5 %.

3.3.2 	Mikrooganisme yang Digunakan
Mikroorganisme yang digunakan dalam penelitian ini merupakan kelompok jamur dalam kultur tercampur yang berasal dari sludge collector instalasi pengolahan limbah. Kultur tercampur ini merupakan kultur yang digunakan pada penelitian sebelumnya yaitu oleh Krisnamurti, 2005. 

Penggunaan mikrooganisme ini dikarenakan mikroorganisme tersebut sudah terbiasa dengan limbah yang mengandung zat warna tekstil. 
Adapun jenis jamur yang digunakan setelah dilakukan pengamatan merupakan jenis :
•	Aspergillus sp 
•	Penicillium sp
•	Saccharomyces sp
3.3.3 	Penyiapan Zat Warna Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5)
3.3.3.1 Pembuatan Larutan Stock Zat Warna CIRB 5
Zat warna yang digunakan dalam penelitian ini adalah Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5) yang kemudian dibuat limbah tekstil buatan (artifisial). Pembuatan larutan stock CIRB 5 ini dilakukan dengan cara menimbang 1 gr zat warna CIRB 5 bubuk dan melarutkannya dalam labu ukur 1000 ml dengan aquadest sampai dengan volume 1000 ml sehingga konsentrasi zat warna menjadi 1000 mg/L. 
Apabila akan membuat limbah tekstil buatan dengan konsentrasi yang diinginkan maka dilakukan pengenceran dari larutan zat warna stock 1000 mg/L. 

3.3.3.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Konsentrasi Zat Warna CIRB 5
Untuk mengetahui penyisihan warna oleh jamur maka terlebih dahulu harus ditentukan panjang gelombang dari zat warna CIRB 5 itu sendiri. Setelah diperoleh panjang gelombang maksimum, kemudian dibuat kurva kalibrasi warna CIRB 5. Kurva ini dibuat untuk mengkonversi nilai absorban warna menjadi nilai konsentarsi warna CIRB 5. Dengan diketahuinya nilai konsentrasi warna, maka untuk selanjutnya prosentase penyisihan warna biru yang terjadi dapat dihitung.

Pencarian panjang gelombang maksimum untuk zat warna CIRB 5 dilakukan dengan cara diukur dengan menggunakan UV Vis Scan Spektrofotometri (Rusmaya, 2000). Hasil yang diperoleh memperlihatkan bahwa panjang gelombang maksimum warna CIRB 5 yang didapat yaitu 608 nm. Tetapi karena kemampuan alat spektrofotometri yang digunakan pada penelitian ini tidak bisa melebihi panjang gelombang 600 nm, maka untuk mengukur konsentrasi warna CIRB 5 pada penelitian ini digunakan panjang gelombang maksimum yang terbaca pada alat spektrofotometer yaitu 600 nm. Dengan panjang gelombang 600 nm dibuat kurva kalibrasi warna CIRB 5 yang berupa garis linier. 

3.3.4 	Penyiapan Jamur Mati sebagai Biosorben
Penyiapan jamur mati sebagai biosorben dilakukan untuk memperoleh jamur mati yang cukup banyak untuk digunakan sebagai biosorben.
Langkah-langkah dalam menyiapkan jamur mati sebagai biosorben : 
1.	Inokulasi jamur yang berasal dari PDA miring ke dalam labu Erlenmeyer yang berisi PDC berpH 4. 
2.	Kemudian, shaker dan inkubasi pada suhu kamar (26 – 30oC) selama 4 hari. 
3.	Setelah terbentuk pelet-pelet jamur, sterilkan dalam autoclave bersuhu 121oC dan bertekanan 1,5 atm selama 30 menit (Fu dan Viraraghavan, 2002). 
4.	Setelah biakan jamur steril, pisahkan miselium dari filtratnya dengan cara disaring pada kertas saring dan dicuci dengan aquadest beberapa kali (O’Mahony et.al, 2002). 
5.	Keringkan miselia yang telah mati dalam oven pada suhu 60 – 70oC selama 48 jam (Fu dan Viraraghavan, 2002). 
6.	Haluskan miselia yang telah kering dan saring menggunakan saringan 40 – 60 mesh, dan biosorben yang digunakan berukuran 50 mesh (Ø biosorben 0,508 mm). 
7.	Biosorben yang belum digunakan disimpan dalam desikator untuk menjaga agar tetap kering. 

3.3.5 	Penyiapan Karbon Aktif
Pada penelitian ini, adsorben pembanding yang digunakan untuk penyisihan zat warna CIRB 5 adalah karbon aktif granular yang diperoleh dari PT. Bratako Chemical.
Langkah-langkah penyiapan karbon aktif sebagai adsorben :
1.	Haluskan dan saring karbon aktif menggunakan saringan yang berukuran 40 – 60 mesh, dan adsorben yang digunakan berukuran 50 mesh (Ø biosorben 0,508 mm). 
2.	Setelah ukuran karbon aktif seragam, kemudian lakukan pencucian karbon aktif dengan aquadest hingga air bilasannya bersih. 
3.	Lalu keringkan dalam oven pada suhu 105oC selama semalaman hingga berat karbon aktif konstan (Tsai et.al, 2000). 
4.	Karbon aktif yang belum digunakan dalam penelitian disimpan dalam desikator untuk menjaga agar tetap kering.

3.4 	Penelitian Pendahuluan
3.4.1 	Penentuan pH Optimum
3.4.1.1 Penentuan pH Optimum Penyisihan Zat Warna CIRB 5 oleh Jamur Mati
Penentuan pH optimum penyisihan zat warna CIRB 5 oleh jamur mati dilakukan secara batch dalam labu Erlenmeyer 250 ml. 
Langkah-langkah penentuan pH optimum oleh jamur mati :
1.	Isi labu Erlenmeyer dengan 75 ml larutan zat warna CIRB 5 dengan konsentrasi yang berbeda yaitu 60, 80 dan 100 mg/L.
2.	Lakukan pengaturan nilai pH (pH 1 – 12) dengan menggunakan larutan HCl dan NaOH.
3.	Tambahkan 0,5 gr biosorben jamur mati ke dalam labu Erlenmeyer tersebut.
4.	Setelah itu lakukan pengadukkan pada shaker dengan kecepatan 100 – 125 rpm selama 24 jam pada suhu ruang (Fu dan Viraraghavan, 2002). 
5.	Setelah 24 jam pengadukkan, ambil 10 ml larutan sampel zat warna dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2000 rpm. 
6.	Ukur sampel larutan zat warna secara triplo atau sebanyak tiga kali pengukuran. 
pH yang memberikan efisiensi penyisihan zat warna yang paling besar/optimal dipilih sebagai pH optimum dan digunakan pada percobaan penentuan waktu kesetimbangan/waktu jenuh dan penentuan persamaan isoterm.

3.4.1.2 Penentuan pH Optimum Penyisihan Zat Warna CIRB 5 oleh Karbon Aktif
Penentuan pH optimum penyisihan zat warna CIRB 5 oleh karbon aktif dilakukan secara batch dalam labu Erlenmeyer 250 ml. 
Langkah-langkah penentuan pH optimum oleh karbon aktif :
1.	Isi labu Erlenmeyer dengan 75 ml larutan zat warna CIRB 5 dengan konsentrasi yang berbeda yaitu 60, 80 dan 100 mg/L.
2.	Lakukan pengaturan nilai pH (pH 1 – 12) dengan menggunakan larutan HCl dan NaOH.
3.	Tambahkan 0,5 gr adsorben karbon aktif ke dalam labu Erlenmeyer tersebut.
4.	Lakukan pengadukkan pada shaker dengan kecepatan 100 – 125 rpm selama 24 jam pada suhu ruang (Fu dan Viraraghavan, 2002).
5.	Setelah 24 jam pengadukkan, ambil 10 ml larutan sampel zat warna dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2000 rpm.
6.	Ukur sampel larutan zat warna secara triplo atau sebanyak tiga kali pengukuran. 
pH yang memberikan efisiensi penyisihan zat warna yang paling besar/optimal dipilih sebagai pH optimum dan digunakan pada percobaan penentuan waktu kesetimbangan/waktu jenuh dan penentuan persamaan isoterm.

3.4.2 	Penentuan Waktu Kesetimbangan/Waktu Jenuh Penyisihan Zat Warna CIRB 5
3.4.2.1 Penentuan Waktu Kesetimbangan/Waktu Jenuh Penyisihan Zat 
Warna CIRB 5 oleh Jamur Mati
Penentuan waktu kesetimbangan/waktu jenuh penyisihan zat warna CIRB 5 oleh jamur mati dilakukan secara batch dalam labu Erlenmeyer 250 ml dan dilakukan pada pH optimum yang telah diketahui sebelumnya.  Langkah-langkah penentuan waktu kesetimbangan oleh jamur mati :
1.	Tambahkan 0,5 gr biosorben jamur mati ke dalam 75 ml larutan zat warna CIRB 5 dengan konsentrasi yang berbeda (yaitu 60, 80 dan 100 mg/L) pada pH optimum. 
2.	Lakukan pengadukan dengan shaker pada  kecepatan 100 – 125 rpm dan pada suhu ruang (Fu dan Viraraghavan, 2002). 
3.	Selanjutnya ambil 10 ml larutan sampel zat warna setiap 25 menit dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2000 rpm.
4.	Ukur sampel zat warna secara triplo atau sebanyak tiga kali pengukuran. Ulangi pengukuran sampel ini terus menerus sampai terjadi kondisi setimbang/jenuh dimana tidak ada lagi penurunan konsentrasi zat warna (nilai absorbannya tetap). 
5.	Lakukan pula koreksi volume dalam labu Erlenmeyer setiap setelah pengambilan sampel dilakukan yaitu dengan memasukkan kembali sampel yang telah dilakukan pengukuran. 
 
3.4.2.2 Penentuan Waktu Kesetimbangan/Waktu Jenuh Penyisihan Zat 
Warna CIRB 5 oleh Karbon Aktif
Penentuan waktu kesetimbangan/waktu jenuh penyisihan zat warna CIRB 5 oleh karbon aktif dilakukan secara batch dalam labu Erlenmeyer 250 ml dan dilakukan pada pH optimum yang telah diketahui sebelumnya. 

Langkah-langkah penentuan waktu kesetimbangan oleh karbon aktif :
1.	Tambahkan 0,5 gr adsorben karbon aktif ke dalam 75 ml larutan zat warna CIRB 5 dengan konsentrasi yang berbeda (yaitu 60, 80 dan   100 mg/L) pada pH optimum. 
2.	Kemudian lakukan pengadukan pada shaker dengan kecepatan 100 – 125 rpm dan pada suhu ruang (Fu dan Viraraghavan, 2002). 
3.	Selanjutnya ambil 10 ml larutan sampel zat warna setiap 25 menit dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2000 rpm. 
4.	Ukur sampel zat warna secara triplo atau sebanyak tiga kali pengukuran. Ulangi pengukuran sampel ini terus menerus sampai terjadi kondisi setimbang/jenuh dimana tidak ada lagi penurunan konsentrasi zat warna (nilai absorbannya tetap). 
5.	Lakukan pula koreksi volume dalam labu Erlenmeyer setiap setelah melakukan pengambilan sampel yaitu dengan memasukkan kembali sampel yang telah dilakukan pengukuran. 

3.5 	Penelitian Utama
3.5.1 	Penentuan Persamaan Isoterm Sorpsi Terhadap Penyisihan Zat 
Warna Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5) oleh Jamur Mati
Penentuan persamaan isoterm sorpsi terhadap penyisihan zat warna CIRB 5 oleh jamur mati dilakukan secara batch dalam kolom adsorpsi. Penelitian ini dilakukan pada pH optimum dan waktu kesetimbangan/ waktu jenuh yang telah diketahui sebelumnya. 
Langkah-langkah penentuan persamaan isoterm sorpsi :
1.	Masukkan biosorben jamur mati dengan variasi berat awal yaitu 0,05; 0,14; 0,23; 0,32; 0,41 dan 0,5 gr kemudian diubah menjadi 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,12 dan 0,14 gr ke dalam larutan zat warna CIRB 5 yang telah divariasikan konsentrasinya (yaitu 60, 80 dan 100 mg/L).
2.	Kemudian lakukan pengadukan dalam kolom adsorpsi pada kecepatan 125 rpm dan kolom adsorpsi dioperasikan pada suhu 25oC. 
3.	Setelah waktu kesetimbangan/waktu jenuh, ambil 10 ml larutan sampel zat warna setiap 30 menit dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2000 rpm. 
Penggunaan waktu pengambilan sampel setiap 30 menit setelah waktu jenuh, dikarenakan pada penentuan isoterm sorpsi terdapat pada lingkungan yang berbeda yaitu dilakukan pada kolom adosrpsi dan dilakukan perlakuan temperatur yang konstan (tetap). 
4.	Ukur sampel zat warna secara triplo atau sebanyak tiga kali pengukuran. 
5.	Lakukan pula koreksi volume dalam kolom adsorpsi setiap setelah melakukan pengambilan sampel yaitu dengan memasukkan kembali sampel yang telah dilakukan pengukuran. 
6.	Dan dalam percobaan perlu adanya kontrol, yaitu perlakukan zat warna CIRB 5 tanpa biosorben.

3.5.2 	Penentuan Persamaan Isoterm Sorpsi Terhadap Penyisihan Zat 
Warna Colour Index Reactive Blue 5 (CIRB 5) oleh Karbon Aktif
Penentuan persamaan isoterm sorpsi terhadap penyisihan zat warna CIRB 5 oleh karbon aktif dilakukan secara batch dalam kolom adsorpsi. Penelitian ini dilakukan pada pH optimum dan waktu kesetimbangan/ waktu jenuh yang telah diketahui sebelumnya. 
Langkah-langkah penentuan persamaan isoterm sorpsi : 
1.	Masukkan adsorben karbon aktif dengan variasi berat (yaitu 0,05; 0,14; 0,23; 0,32; 0,41 dan 0,5 gr) ke dalam larutan zat warna CIRB 5 yang telah divariasikan konsentrasinya (yaitu 60, 80 dan 100 mg/L). 
2.	Kemudian lakukan pengadukan dalam kolom adsorpsi pada kecepatan 125 rpm dan kolom adsorpsi dioperasikan pada suhu 25oC. 
3.	Setelah waktu kesetimbangan/waktu jenuh, ambil 10 ml larutan sampel zat warna setiap 30 menit dan sentrifugasi selama 10 menit pada 2000 rpm.
Penggunaan waktu pengambilan sampel setiap 30 menit setelah waktu jenuh, dikarenakan pada penentuan isoterm sorpsi terdapat pada lingkungan yang berbeda yaitu dilakukan pada kolom adosrpsi dan dilakukan perlakuan temperatur yang konstan (tetap).
4.	Ukur sampel zat warna secara triplo atau sebanyak tiga kali pengukuran.
5.	Selain itu lakukan pula koreksi volume dalam labu Erlenmeyer setiap setelah melakukan pengambilan sampel yaitu dengan memasukkan kembali sampel yang telah dilakukan pengukuran.
6.	Dan dalam percobaan perlu adanya kontrol, yaitu perlakukan zat warna CIRB 5 tanpa adsorben.

Selanjutnya adalah menentukan persamaan isoterm sorpsi Freundlich dan isoterm sorpsi  Langmuir dengan membuat kurva linear dari persamaan tersebut dengan data yang diambil dari sampel. Kemudian dicari derajat determinasi (R2) dari masing-masing kurva dan dilakukan pemilihan persamaan isoterm sorpsi. Setelah didapatkan persamaan yang terpilih lalu dilakukan penentuan kapasitas adsorpsi jamur mati dan karbon aktif terhadap zat warna CIRB 5.

	Persamaan isoterm sorpsi Freundlich dan isoterm sorpsi Langmuir yang 	akan digunakan telah dijelaskan pada Bab II (hal 24).

3.6 	Parameter yang Diukur
Pada pengambilan sampel dilakukan pemeriksaan terhadap sampel secara triplo (3 kali) agar diperoleh data yang akurat. Adapun parameter yang diukur pada sampel dalam penelitian ini adalah :
1.	Konsentrasi Zat Warna
Konsentrasi warna diukur dengan spektrofotometer MILTON ROY SPECTRONIC 20D dengan panjang gelombang tertentu sehingga diperoleh nilai adsorbannya. Sebelum warna diukur dengan spektrofotometer MILTON ROY SPECTRONIC 20D dilakukan sentrifugasi. 
Sentrifugasi dilakukan agar terjadi pemisahan antara cairan dengan padatan. Setelah proses sentrifugasi selesai dilakukan, cairan yang terpisah tersebut digunakan untuk pengukuran warna.
Prosedur penggunaan spektrofotometer  Spektronic 20D :
•	Spektrofotometer dinyalakan dan dipanaskannya selama ± 15 menit
•	Tombol panjang gelombang diputar disesuaikan dengan larutan yang akan diukur
•	Memilih mode transmittance dan nolkan transmittannya
•	Kuvet berisi larutan blanko dimasukkan (garis pada kuvet harus sejajar dengan garis pada spektrofotometer) dan permukaan luar kuvet harus kering
•	Transmitan diatur sampai terbaca nilai 100%
•	Blanko diganti dengan sampel yang akan diukur
•	Transmitan atau absorban yang muncul dilayar dibaca
•	Konsentrasi larutan diperoleh dari hasil nilai absorban yang diplotkan ke dalam kurva kalibrasi. 

2.   pH
pH merupakan istilah umum untuk menyatakan derajat keasaman atau basa pada suatu larutan. Oleh karena itu pH merupakan parameter penting dalam pengolahan air buangan. Prosedur pengukuran pH :
•	Elektroda dicuci dengan aquadest kemudian dikeringkan dengan kertas hisap.
•	pH meter dikalibrasi dengan larutan buffer pH  4.0 dan buffer pH 9.0
•	Elektroda dicelupkan ke dalam sampel yang akan diukur.
•	pH meter dinyalakan, pembacaan pH meter menunjukkan nilai pH dari sampel tersebut.